Book/Report

FZJ-2018-03530

http://join2-wiki.gsi.de/foswiki/pub/Main/Artwork/join2_logo100x88.png Isolierung zweier Komponenten des Proteintranslokations-Apparates von $\textit{Bacillus}$ und $\textit{Staphylococcus}$

Overhoff, B. (Corresponding author)FZJ*

1991
Forschungszentrum Jülich GmbH Zentralbibliothek, Verlag Jülich

Please use a persistent id in citations: http://hdl.handle.net/2128/18919

Report No.: Juel-2494

Abstract: Während zahlreiche Komponenten des Proteinexport-Apparates des Gram negativen Bakteriums $\textit{Escherichia coli}$ identifiziert und charakterisiert wurden,ist über den Mechanismus der Proteintranslokation Gram positiver Bakterien nur wenig bekannt. In der vorliegenden Arbeit wurde mit Hilfe unterschiedlicherexperimenteller Ansätze versucht, Komponenten des Poteintranslokations-Apparates der Gram positiven Organismen $\textit{Bacillus}$ und $\textit{Staphylococcus}$ zu isolieren. Über den Ansatz der heterologen Komplementation der $\textit{E.coli}$ Mutante MM52, die einen temperatursensitiven Defekt im $\textit{SecA}$, einer essentiellen Komponente des Proteinexport-Apparates, trägt, wurde das Gen $\textit{rplM}$ aus dem Organismus $\textit{Staphylococcus carnosus}$ isoliert. Das 0,6kB umfassende Gen kodiert für das ribosomale Protein L13, das wie bei $\textit{E.coli}$ zusammen mit demGen $\textit{rpsI}$ (ribosomales Protein S9) in einem Operon organisiert ist. Das $\textit{S.carnosus}$ L13 weist gegenüber dem L13 Protein aus $\textit{E.coli}$ starke Homologie auf; auf Grund dieser konservierten Struktur wird das heterologe Protein in die Ribosomen von $\textit{E.coli}$ eingebaut. Im Bezug auf das Komplementationsverhalten unterschiedlicher Sekretionsmutanten von $\textit{E.coli}$ zeigt L13 eine pleiotrope Wirkung ; durch geringe Expression des heterologen Proteins kann neben dem $\textit{secA}$ (Ts) Defekt der $\textit{E.coli}$ Mutante MM52 auch der temperatursensitive Wachstumsdefekt der Stämme IQ85 ($\textit{secY}$ Ts) und IT41 ($\textit{lep}$ Ts) supprimiert werden. Während die Expression von $\textit{L13}$ in der Mutante IT41 ($\textit{lep}$) eine Reduktion der Proteinbiosynthese verursacht und somit ein Überleben unter nicht-permissiven Bedingungen ermöglicht, konnte dieser Effekt in den Stämmen MM52 ($\textit{secA}$ Ts) und IQ85 ($\textit{secY}$ Ts) nicht beobachtet werden. Diese Stämme zeigen unter permissiven Bedingungen eine leicht verminderte Akkumulation des OmpA Vorläuferproteins. Über die Methode der Southern Hybridisierung konnte mit Hilfe des $\textit{secA}$ Gens aus $\textit{E.coli}$ als Sonde das aminoterminale $\textit{secA}$ Fragment aus $\textit{Bacillus subtilis}$ isoliert werden. Es kodiert für ein Protein, das zu den ersten 364 Aminosäureresten des $\textit{SecA}$ aus $\textit{E.coli}$ starke Homologie aufweist und mit den gegen das $\textit{E.coli SecA}$ gerichteten Antikörpern kreuzreagiert. Im Gegensatzzum $\textit{E.coli secA}$, das als mittleres von drei Genen in einem Operon organisiert ist, scheint das $\textit{secA}$ von $\textit{B.subtilis}$ unter der Kontrolle des eigenen Promotors zu stehen. Durch ein 275 Aminosäure gropes $\textit{B.subtilis secA}$ Peptid, welches die Konsensussequenz einer ATP-Bindungsstelle aufweist, kann sowohl der Wachstums-, als auch der Protein-Prozessferungsdefekt der $\textit{E.coli}$ Mutante MM52 ($\textit{secA}$ Ts) komplementiert werden.

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Contributing Institute(s):

1. Publikationen vor 2000 (PRE-2000)

Research Program(s):

1. 899 - ohne Topic (POF3-899) (POF3-899)

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Database coverage:

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